俞发荣1，连秀珍2，石军年3
(甘肃政法学院1公安分院实验中心，2计算机学院，甘肃兰州730070；
3兰州大学第一医院呼吸科，甘肃 兰州730030)

摘 要：以Hep荷瘤小鼠为实验对象，每天给予Hep荷瘤小鼠天门冬提取物10．0、2O．0g／kg体重(PO)，连续给药1O天后，对瘤体、胸腺和脾脏重量以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响进行检测分析。结果为：与对照组比，天门冬提取物对Hep瘤体生长抑制率为31．2% 、67．1% ，小鼠碳粒廓清指数分别提高了l1．2 %、37．2%，血清溶血素值分别提高了l9．6%、36．5%，动物胸腺和脾脏的重量明显增加；组织病理学观察，给药组Hep瘤体均见坏死灶，坏死面积与给药剂量呈正相关。
关键词：天门冬提取物；Hep；细胞毒性
中图分类号：R995

    天门冬Asparagus cochinchinensis(Lour．Merr．)，有滋阴润燥，清肺降火之功效，有降血糖、镇咳祛痰、抗菌、利尿、增强免疫功能等作用，其可治疗咳血、肺炎、支气管炎、肾盂肾炎等疾病。本文选取甘肃地产天门冬，采用水煎浓缩方法制得提取物，经口服给药途径探讨其对Hep细胞的毒性作用，以期为天门冬的进一步开发研究和临床应用提供资料。
1 材料和方法
1．1 药物
    天门冬提取物：天门冬购于甘肃医药材公司，水煎、浓缩制得，含生药2．5g／mL，实验时用蒸馏水稀释成所需浓度。5—FU：上海旭东海普药业有限公司生产，批号为050603。实验动物：清洁级BALB／c品系小鼠，体重18g～20g，雄性，购于甘肃省医科院实验动物中心，合格证号：医动字第14—008。Hep细胞株：由中国医学科学院北京药物所引进，甘肃省医学科学研究院药理室传代保种。实验在兰州军区总医院实验动物科清洁级动物实验室完成，环境质量合格证号：医动字第14—O01。
1．2 Hep模型的建立及分组
    选BALB／c小鼠4O只(雄性)，在无菌条件下于右前肢腋皮下接种Hep瘤液0．2mL／20g体重，瘤细胞数为2．7×1O-6／mL，随机分组，每组10只。24h后，模型组：给予等量蒸馏水。5—FU 组：每天腹腔注射5—FU 100mg／kg体重。天门冬提取物1组：每天口服天门冬提取物lOg／kg体重。天门冬提取物2组：每天口服天门冬提取物20g／kg体重。连续给药10d后解剖剥取瘤块，称重，按下列公式计算抑制率。
对照组平均瘤重=  实验组平均瘤中  *100%
                 对照组平均瘤重
    解剖剥取胸腺、脾脏称重，计算10g体重器官指数(器官重／10g体重)。
1．3 对荷瘤小鼠单核吞噬细胞系统功能的影响
    取BALB／c小鼠4O只(雄性)，随机分组4组，每组1O只。各组动物接种Hep瘤细胞后给药10d，尾静脉注射1／l0印度墨汁0．1Ml／lOg体重，5min和10min分别眼底取血20μL，加入质量浓度为lg／L的2Ml Na2CO3溶液中混匀，置680nm处测定吸收值，计算廓清指数。
1．4 对荷瘤小鼠体液免疫功能的影响
    取BALB／c小鼠40只，随机分组4组，每组10只(雄性)。各组动物瘤细胞接种及给药同1．2项，1次／d，于第3次给药后，按0．2mL／20g体重腹腔注射5％鸡红细胞悬液致敏，给药10d摘眼球采血，测光密度，并计算血清半数溶血素值。
半数溶血素值=  样品光密度    ×稀释倍数
               对照管光密度

1．5 统计学处理
    实验数据采用SPSS10．0统计软件中Dunnett单因素方差分析进行统计学处理。
2  结果
2．1 实验动物数量分析
    在上述各项实验过程中，动物未出现异常和死亡，动物数符合统计学要求。
2．2 天门冬提取物对Hep细胞增殖的抑制作用
    分别给予5—FU 或天门冬提取物10、20g／kg体重10d，对Hep瘤体生长抑制率分别为39%和31．2%、67．1%．见表1。
2．3 对Hep瘤组织的毒性作用
    镜见，对照组Hep瘤细胞生长活跃，核分裂像较多见；5—FU 组、给药组Hep瘤体均见部分坏死，或在坏死灶边缘出现纤维组织增生，间质水肿。其中以20g／kg体重组坏死较明显。
2．4 天门冬提取物对Hep荷瘤小鼠免疫功能的影响
    给予5—FU或不同剂量天门冬提取物后10d，小鼠碳粒廓清指数分别提高了19．3%和11．2%、37．2%血清溶血素值分别提高了25．7%和19．6%、36．5%，对胸腺和脾脏的重量均有所提高。见表1。

表1 天门冬提取物对Hep细胞的毒性作用及荷瘤小鼠免疫功能的影响(X±S，n=lO)
组别               瘤重/g       廓清指数（×10-3）   半数溶血值CH50    胸腺指数       脾指数
对照组           3.46±0.3         22.3±0.2           29.6±0.3       11.2±0.2     86.4±0.6
5—FU 组         2.11±0.2α        26.6±0.4α          37.2±0.2α      13.3±0.3α    91.3±0.4
天门冬10g/kg组   2.38±0.4α        24.8±0.2α          35.7±0.2α      16.6±0.3α   102.2±0.3α
天门冬20g/kg组   1.14±0.3α        30.6±0.2α          40.4±0.4α      18.6±0.2α   113.3±0.3α
注 与对照组比：nPd<0．01
3  讨论
    据临床报道，天门冬对一般良性乳房肿瘤，尤其是乳房小叶增生，不论肿块大小，奏效迅速，大多数可获治愈。52例乳腺小叶增生和纤维腺瘤患者，治疗后30例临床痊愈。16例显效，5例有效，1例无效。对乳腺癌也有一定的近期疗效，表现为用药后肿块缩小，质地变软，但远期疗效尚不显著，表现为用药一段时间后，即呈相持状态。体外实验表明，天门冬对急性淋巴细胞型白血病、慢性粒细胞型白血病及急性单核细胞型白血病患者白细胞脱氢酶有一定的抑制作用[1]。动物体内实验表明，天门冬总多糖对小鼠肉瘤S180有明显的抑制作用[2]。本文采用甘肃地产的天门冬提取物对Hep细胞的毒性作用和荷瘤小鼠免疫功能的影响进行了实验研究，结果表明，每天给予天门冬提取物10、20g／kg体重，10天后，对Hep细胞生长抑制率分别为31．2 、67．1 9／5；组织病理学镜检，给药组瘤体均见部分坏死，或在坏死灶边缘出现纤维组织增生，间质水肿，其中以20g／kg体重组坏死较明显，坏死面积较大。给药10d，小鼠碳粒廓清指数显著提高，免疫器官的重量有所增加，同时使小鼠血清溶血素值增高。结果提示，天门冬提取物对Hep细胞增殖的抑制作用的机制一方面直接抑制肿瘤细胞增殖或破坏肿瘤细胞膜结构，致使瘤体坏死；另一方面，可能与保护免疫器官、增强免疫系统功能有关。
参考文献：
[1] 王庆端，程心超．中药防治肿瘤的研究[J]．中国医药报，2003，65：11—14
[2] 杜旭华，郭允珍．抗癌植物药的开发研究IV：中药天门冬的多糖类抗癌活性成份的提取与分离[J]．沈阳药学院学报，1990，7：197．