刘诗琼1，秦晓群2，李世胜3
(1．湖南永州职业技术学院医学院，湖南永州425006；2．中南大学湘雅医学院，湖南长沙410078；3．湖南永州职院医学院附属医院心血管内科，湖南永州425006)

[摘要]目的：研究黄精多糖类物质的抗疲劳作用。方法：随机将健康雄性小鼠分为4组，分别为黄精多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白对照组，连续灌胃给药28d后，测定小鼠的游泳时间、爬杆时间、血乳酸、血中尿素氮、肝糖原和肌糖原含量等指标的变化。结果：黄精多糖能增强小鼠游泳耐力、延长爬杆时间，降低血乳酸、血中尿素氮含量，提高肝糖原含量和肌糖原含量。结论：黄精具有很好的抗疲劳作用。
[关键词]黄精多糖；抗疲劳
[中图分类号]R-332【文献标识码】A【文章编号】1674-4721(2009)05(b)-031-03

    黄精(polygonatum sibiricum  Red．)又名老虎姜、太阳草、鸡头参，是百合科黄精属多年生草本植物的干燥根茎，始载于《名医别录》，李时珍引《神仙草芝经》云：“黄精宽中益气，使五脏调和，肌肉充盈，骨髓坚强。其力倍增，多年不老，颜色显明，发白更黑，齿落更生。”黄精是一种传统名贵中药，具有宽中益气，益肾填精，滋阴润肺，生津补脾，安五脏，填精髓等功效，在抗菌、解毒、抗疲劳、抗衰老等方面均有较好的效果[2]。其化学成分主要有：黄精多糖、甾体皂苷、蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、维生素和多种对人体有用的氨基酸等化合物[2]，其中黄精多糖(polygonatum sibiricum poly Saccharides)是黄精化学组成的一个重要组成部分，也是黄精主要生物学活性成分之一。
    近些年来科研工作者对黄精的生化药理作了大量的研究。证实了黄精具有抗疲劳、抗衰老、增强免疫力功能。有资料显示黄精多糖类物质有抗疲劳作用[3]。本文通过小鼠游泳试验、爬杆试验以及相应的生化指标：尿素、血乳酸、肝糖原和肌糖原及脑内谷氨酸(GLu)和一氨基丁酸(GABA)含量变化检测，对黄精抗疲劳功能进行研究。
1材料与方法
1．1实验动物
    昆明种雄性小鼠，6～8周龄，体重18～22g，购自中南大学湘雅医学院(许可证号：SCXK湘2007—2008)，饲养于室内通风柜，每天正常供食及饮水。
将小鼠随机分为4组，每组20只，组间体重经t检验无显著差异。对照组、低剂量、中剂量组和高剂量组，饲养受试物量分别为：0、400、800和1200meCkg的黄精多糖，对照组给同体积的蒸馏水。每1O克体重给予受试物0．2ml，采取灌胃法，连续给予受试物28d后，测定各指标。
1．2药品与仪器试剂
1．2．1受试物黄精多糖的提取分离与精制[4]
    取干燥的黄精根茎，打碎过15目筛网，称取粉末100g，用石油醚于80～90℃下回流脱去黄精粉末中的脂肪，直至石油醚溶剂滴在滤纸上不出现油痕为止。蒸干溶剂后，药渣用80％的乙醇浸渍过夜，于80～90℃回流提取2次，过滤，将药渣用500ml蒸馏水90℃浸提1h．再用等量蒸馏水重复浸提30min，过滤后合并滤液。减压浓缩至150ml。用氯仿～正丁醇萃取多次。除去浓缩液中的蛋白质，并用1％的活性炭脱色2次．抽滤后的滤液加入95％乙醇使含醇量达80％，静置过夜后过滤，所得滤饼依次用95％乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤4次，真空干燥，得精制的黄精多糖。
1．2．2试剂
    谷氨酸和γ一氨基丁酸(Sigma公司)；丹酰氯(Fluka公司)；尿素氮测定试剂盒(北京化工厂)。其他试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
1．2．3仪器
    LC一2010岛津高效液相色谱仪(日本)；YC一30超速离心机(北京安必升科技发展有限公司)；752W分光光度计f上海精科实业有限公司)，FA一1004分析天平f上海精科实业有限公司)；游泳箱(120cmx70cmx80cm，自制)。
1．3小鼠体力性疲劳模型的建立与试验方法
1．3．1游泳试验[5]
    连续给药28d，末次给予受试物30min后，在大鼠尾根部负以小鼠体重5％的铅丝，放入水温(25±1)，水深40cm的游泳箱中，用秒表记录自游泳开始至力竭（小鼠沉没后10S仍不能浮出水面)的时间作为小鼠力竭性游泳时间。
1．3．2爬杆试验[5]
    连续给药28d．末次给予受试物30min后．将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒上，使其肌肉处于紧张状态，记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃上跌落下来的时间。第3次跌落时终止实验，累计3次的时间作为爬杆时间。
1．4血尿素的测定
    连续给药28d．末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温(25±1)℃的游泳箱中游泳90min，休息60min后摘眼球取血，取血清用试剂盒（二乙酰一肟法）测定[6]。
1．5血乳酸的测定
    连续给药28d，末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温(30±1)℃的水中负重5％游泳10min停止，分别从游泳前、游泳之后0、15、60min的小鼠眼内眦静脉丛取血。于5ml离心管中加入I％NaF溶液0．48ml，准确吸取全血20 l加入试管底部。用试管上清液冲洗微量吸管数次．再加入蛋白沉淀剂1．5ml，振荡混匀，3000r／min离心10min，取上清液测定嘲。
1．6肝糖原的测定
    连续给药28d．末次给予受试物30min后，将小鼠放于水温（30±1）℃的水中游泳30min后停止，立即处死小鼠取出肝脏，精确称取200mg，加入TCA4ml，每管匀浆1min，3000r／min离心15min，取上清液转移至另一试管内。在沉淀中加入TCA4ml。匀浆1min，再次离心15min，取上清液，与第一次离心的上清液合并。充分混匀。取1ml上清液，每管加入95％的乙醇4ml，充分混匀至两种液体间不留有界面。室温放置过夜。沉淀完全后将试管于3000r／rain离心15min。小心倒掉上清液并使试管放置10min，用1ml蒸馏水振荡溶解后测定[6] 。
1．7肌糖原的测定[7]
    连续给药28d，末次给予受试物30arin后，将小鼠放于水温(30±1)℃的水中游泳60min后停止。立即处死小鼠取出肌肉，以0．9％NaC1溶液冲洗后，用滤纸吸干，准确称取肌肉1g，放人盛有3ml30％KOH的试管中．置沸水浴煮20min．取出冷却后，将其转移至50ml容量瓶中，用水多次洗涤试管，一并转入容量瓶，加水稀至刻度，摇匀待用。置沸水浴中冷却后在620am波长处测量光吸收值．同时空白对照。
1．8小鼠脑内GLu和GABA含量的HPLC测定[8]
    脑组织加蒸馏水后超声匀浆加入高氯酸，25000r／min离心15min，4℃取上清液，滴加KHCO3，调至pH9．8。加入丹酰氯／N酮，加热反应40min后，滴加HC1终止反应．30000r／min离心10min，取上清液进行HPLC测定。
1．9数据统计学处理
    用SPSS11．5统计软件对测量得到的数据进行处理．以(2+s)表示。以P<0．05为差异有统计学意义。
2结果与分析
2．1黄精多糖对小鼠游泳时间、爬杆时间、血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响
    将实验组与对照组的实验结果相对比，高剂量组游泳时间提高了54％(p<o．01)，中剂量组游泳时间提高了32％（P<0．05)。实验组与对照组相比，低剂量组爬杆时间提高了123％(P<0．OO1)，中剂量组爬杆时间提高了135％(P<O．OO1)，高剂量组爬杆时间提高了294％(e<o．OO1)。实验组与对照组相比，高剂量组尿素氮含量降低了17％（P<0。01)，中剂量组降低了14％(p<o．05)。中剂量组肝糖原含量为对照组的2．5倍（P<0．01)，高剂量组肝糖原含量为对照组的3．7倍（P<．001），见表1。实验组与对照组相比，爬杆时间和游泳时问显著提高；血清尿素氮明显降低；肝糖原含量显著性提高．表明黄精多糖具有延缓疲劳出现的作用。

表1黄精多糖对小鼠游泳时间、爬杆时间、血清尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影响
    组别    小鼠数（n）  游泳时间（s）       爬杠时间（s）    尿素氮含量（mg/dl）   肝糖原（%肝脏）  肌糖原（%肌肉）  
   对照组 20    278±30         297±104   25.7±1.5       0.5±0.2       0.27±0.02
  低剂量组 20    299±41         682±135   5.7±1.6       0.6±0.6       0.32±0.03
  中剂量组 20    376±49         711±143   21.5±2.1       1.7±0.5       0.47±0.04
  高剂量组 20    437±65        1163±186   21.6±2.2       2.5±1.2       0.48±0.04

与对照组相比 p<0.05, p<0.01, p<0.001

2．2黄精多糖对小鼠血乳酸含量的影响
    高剂量组游泳后0min和15min实验组与对照组相比，血乳酸含量分别降低了25％(p<0．05)，并且趋于游泳前的乳酸含量，见表2。运动后15min内血乳酸含量分别降低并趋于正常对照组，说明黄精多糖具有促进体力性疲劳消除的积极作用。

表2黄精多糖对小鼠血乳酸的影响
   组别      小鼠（n）   游泳前游      游泳后0 min     游泳后15 min   游泳后60 min    
  对照组        20      25.2±4.7       44.8±4.6        30.5±6.4     18.2±3.2
 低剂量组       20      23.7±4.2       41.9±5.3        25.4±3.5     17.4±3.9
 中剂量组       20      22.9±3.8       40.5±4.4        23.9±3.0     16.8±3.4
 高剂量组       20      22.8±4.4       34.7±4.1        22.7±2.9     15.3±2.7

与对照组比较，P<0.05

2．3黄精多糖对小鼠脑中GLu和GABA的影响
    小鼠脑内谷氨酸和一氨基丁酸的含量，中剂量组和高剂量组均明显高于对照N(P<O．05)，见表3，表明黄精多糖不仅能提高抑制性氨基酸(γ～氨基丁酸)含量，同时也能提高兴奋性氨基酸(谷氨酸)含量[9]。
表3黄精多糖对小鼠脑中GLu和GABA的影响
    组别    小鼠数（n）   GLu         GABA
    对照组     20      42.5±6.1   7.25±1.70
   低剂量组    20      44.6±7.7   7.64±2.20
   中剂量组    20      63.8±9.1   10.05±2.50
   高剂量组    20      68.1±8.4   12．32±3.20

与对照组相比较，P<0．05。

3讨论
    糖是机体最重要的能源物质，其中肌糖原是骨骼肌中可以随时动用的贮备能源，其贮备量与运动的耐力呈正相关：肝糖原的主要作用是维持血糖的相对稳定．随着运动时间的延长，血糖水平开始下降，为了补偿血糖的消耗，肝糖原分解和糖异生作用增强，一旦肝糖原耗竭，会使运动肌供能不足，导致外周疲劳。本实验结果表明黄精的抗疲劳作用可能与增加肝糖原、肌糖原的储备有关。当机体长时间不能通过糖、脂肪分解代谢得到足够能量时，机体蛋白质与氨基酸分解代谢随之增强，产生大量的尿素氮。机体血尿素氮含量随运动负荷增加而增加，而且机体对负荷的适应性越差．产生的尿素氮越多．表明黄精可能通过抑制血清尿素氮的产生起到抗疲劳的作用。
以上实验数据表明，黄精多糖具有调整体内代谢和快速加强体质恢复，消除疲劳的作用。

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