王庭富 孟正木
（江苏洪泽县人民医院．洪泽22310041 中国药科大学植物化学教研室，南京210009）
摘要 对人参皂甙Rg3的免疫功能进行了实验研究，结果表明：人参皂甙Rg3能明显提高小鼠碳粒廊清速率、免疫器官重量、血清溶血素含量、脾淋巴细胞转化和NK活性，其结果均具有显著性差异(p<O．05)，表明人参皂甙Rg3具有提高免疫功能的作用。
关键词 人参皂甙Rg3；免疫功能；碳粒廊清；血清溶血素；免疫器官
人参皂甙Rg3是从中药材人参(Panax gmseng C.A.Mey)中提取的活性成份之一，据报道[1],人参中含有十多种皂甙(ginsenoside)，如有人参皂甙Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rn等，业已药理活性研究表明人参总皂甙、多糖成分对正常功能RES的吞噬功能有激活作用．能使各种抗原刺激后的动物抗体产生明显增加[2]，并有人参单体成分药理研究的报道[3,4]。但人参皂甙Rg3的药理研究极少，其对免疫功能的实验研究未见报道，本文首次研究发现Rg3具有明显提高免疫功能的作用，因此具有较大的开发价值。
1 实验材料
1.1 材料
人参购自南京市药材公司，人参皂甙Rg3系将人参以低浓度乙醇提取得浸膏后，继以正丁醇水分配，取正丁醇莘取部分经硅胶、Rp8、Rp18柱层析所得的单体成分，经鉴定为人参皂甙Rg3，批号；950816；5-FU(南通制药厂，批号:950610)；CTX(上海第十二制药厂，批号：950518)；印度墨汁(1：l0)，上海长江日用粘合材料厂；RPM11640(GIBCO公司)；吩嗪二甲酯硫酸盐，硝基氰化四氮唑盐，氧化型辅酶为上海生化所产品。
1．2动物
昆明种小鼠，体重l8～22g，雌雄兼用，合格证：95104；绵羊红细胞(SRBC)购自江苏卫生防疫站；补体，3只豚鼠的新鲜血清1：10稀释。
1．3仪器设奋
DG3022A型酶联免疫检测仪(华东电子管厂)；紫外分光光度计(岛津，UV-210)，CO2孵箱、分析天平(德国Sartorius)，超净台。
2 方法及结果
2．1 对碳粒廓清速率的影响[3]
将小鼠雌雄分开，随机分组，连续给本品8d后，尾静脉注射印度墨汁每只100μl，于1 min和5 min后，分别眼眶取血，于680 nm处测定吸收值，计算廓清指数。结果表明，Rg3 3个剂量组均能明显增加碳粒廓清速率，其中以3.0mg/kg效果最佳(表1)。
Tab 1.Effect of Rg3 0n the clearance of charcoal garucles in mice.(n=10)
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Group |
Dose(mg/kg×d) |
K value |
|
Control |
0 |
0.0011±0.001 |
|
Rg3 |
1.5×8 |
0.0086±0.003 |
|
Rg3 |
3.0×8 |
0.0210±0.005 |
|
Rg3 |
6.0×8 |
0.0060±0.002 |
|
5-FU |
5.0×8 |
0.0010±0.009 |
P> 0．05， P< O．01．vs control
2．2 对荷瘤鼠免疫器官重量的影响
接种癌细胞tS180细胞悬液0．2ml/只，次日给药，连续8d后解剖，取出脾脏和胸腺，并称重，计算10g体重的脏器mg重，结果本品的三个剂量组对脾脏和胸腺的重量均有明显的增加，其中6mg/kg剂量组的胸腺指数和3mg/Ikg剂量组的脾指数增加最明显。
Tab 2．Effect of Rg3 0n the index of spleen and thymus in mice(x=l0)
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Group |
Dose(mg/kg×d) |
Thymus Index |
Spleen index |
|
Control |
0 |
28.97±5.00 |
27.54±18.74 |
|
Rg3 |
1.5×8 |
44.68±6.37 |
66.38±18.74 |
|
Rg3 |
3.0×8 |
48.05±13.47 |
93.28±15.59 |
|
Rg3 |
6.08×8 |
59.05±14.59 |
57.58±4.79 |
|
5-FU |
5.0×8 |
17.54±6.96 |
27.23±23.03 |
P> 0．05， P< O．05，P< O．01．
2．3 对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的彩响[6]
选择K．M种小鼠50只，雌雄各半髓机分组，连续给药8d后,解剖取脾脏，制成脾细胞悬液，加入96孔细咆培养板中，每孔l00μl，再加入PHA100μl，放置5% CO2,37C培养箱中，48h后弃上清液，加入MTT10μl，放置37C，5％CO2孵箱内反应2h，每孔加入酸化异丙酵100μl，振荡溶解，置酶标光度计570nm处测定OD值，结果表明，三个剂量组均能刺激淋巴细胞的增殖，其中以1．5mg/kg和3mg/kg优于6mg/kg组，结果见表3。
Tab 3．Effect of Rg3 on the index of spleen lymphocytes in mice(n=l0)
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Group |
Dose(mg/kg×d) |
OD(X±S) |
Index (K) |
|
Control |
0 |
0.54±0.41 |
|
|
Rg1 |
1.5×8 |
1.10±0.33 |
2.04 |
|
Rg1 |
3.0×8 |
1.09±0.49 |
2.02 |
|
Rg1 |
6.08×8 |
0.99±0.67 |
1.83 |
|
CTX |
10.0×8 |
0.10±0.04 |
0.19 |
P> 0．05， P< O．05，P< O．01．vs control
2．4 对小鼠体液免疫功能的影响[7]
本实验采用血清溶血索分光光度法，测定血清中溶血素含量。首先将小鼠用5%绵羊红细胞腹腔注射0．2ml免疫，同时开始给药，4d后摘眼球取血，分离血清，稀释500倍，再加0．5mlSRBC，在补体的作用下，37C反应10min，离心取上清液，加都氏液．于540nm测定OD值，结果表明，三个剂量组均能促进小鼠血清中溶血索生成，提高体液免疫功能，但剂量可以减少至1．5mg/kg。
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HC=
|
给药组OD值
SRBC半数溶OD值
|
×500
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Tab 4．Effect of Rg3 on hemolysin against SRBC in mice(n=l0)
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Group |
Dose(mg/kg×d) |
HC |
|
Control |
0 |
73.84±18.59 |
|
Rg3 |
1.5×8 |
201.96±57.22 |
|
Rg3 |
3.0×8 |
174.93±34.04 |
|
Rg3 |
6.0×8 |
168.79±43.66 |
|
5-FU |
5.0×8 |
88.26±38.26 |
P> 0．05， P< O．05，P< O．01．vs control
2．5 对荷瘤鼠NK活性的影响8
选择K．M小鼠，给药8d后取脾脏，制成睥细胞悬液，按效应细胞和靶细胞l0：l比例各加100μl置96孔培养板上．于5 %CO2，37C共孵24h,吸上清液100，加底物l00μl，反应5 min，加0．1mol／L柠檬酸50μl置酶标光度计570nm处测定OD值，计算NK活性，结果表明，三个剂量均能提高NK细胞活性，其中以3mg/kg效果最好，结果见表5。
|
NK（%）=
|
实验OD-自然释放OD
最大释放管OD-自然释放管OD |
×500
|
Tab 5．Effect of Rg1 on NK cell acuvny in tumor beanng mice(n=l0)
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Group |
Dose(mg/kg×d) |
OD(X±S) |
NK cell acuvny(K) |
|
Control |
0 |
0.51±0.05 |
19.05 |
|
Rg1 |
1.5×8 |
0.97±0.11 |
73.81 |
|
Rg1 |
3.0×8 |
1.03±0.18 |
80.95 |
|
Rg1 |
6.0×8 |
0.85±0.06 |
59.52 |
P> 0．05， P< O．05，P< O．01．vs control
3 讨论
根据中药免疫药理研究，人参皂甙Rg3具有明显提高小鼠非特异性免疫功能和特异性(包括细咆免疫和体液免疫)免疫功能的作用，其作用强度与剂量有一定关系，综合各项指标分析，以1．5～3．0mg/kg为最佳剂量范围，人参皂甙Rg3可望开发成为一种免疫增强制剂。
参考文献
1 哈荔田、李少种主编，扶正固本与临床，天津科学技术出版社，1984.27
2 沈玲、张均田，人参增强免疫研究新进展.中草药.1996.8(27):499
3 王红燕、徐绥绪、王飞飞，人参单体成分药理活性研究新进展，中国药物化学杂志1992．2(3)：73
4 魏建华、董莉、潘晓鹏等，人参单体皂甙的药理研究简介，人参研究，1997．2：24
5 姚文兵、陈琼华，大黄的生化学研究XXXI，波叶大黄多糖对免疫功能作用中，中国药科大学学报，1990.21(2)：99
6 徐淑云、卞如谦、黄钦田等，一个改进体液免疫测定方法，溶血素测定法.药学学报，1979．14(7)：443
7 徐学瑛、马建吟、黄钦田等．一个改进体液免疫测定方法，溶血素测定法.药学学报，1979．14(7)：443
8 陈丙燕、李元、许建等，简易自然杀伤试验，LDH释放改变方法，上海免疫学杂志，1989．9(4)：218